Western blot yöntemi, bir örnekteki belirli bir proteini tespit eder. Proteinleri boyutlarına göre ayırır, bir membrana aktarır ve bir antikorla inceler. Sonuç, proteinin moleküler ağırlığına karşılık gelen konumda bir banttır. Bant mevcutsa, protein oradadır. Bant yoksa, protein yoktur. Basit bir kavramdır, ancak teknik birçok adımdan oluşur ve birçok hata olasılığı taşır.

İşlem birkaç aşamadan oluşur. Proteinler hücrelerden veya dokulardan ekstrakte edilir ve denatüre edilir. Poliakrilamid jel üzerine yüklenir ve elektroforez ile ayrılır. Proteinler nitroselüloz veya PVDF membrana aktarılır. Membran, spesifik olmayan bağlanmayı önlemek için bloke edilir. Birincil antikor hedef proteine ​​bağlanır. Bir enzime veya florofora bağlı ikincil antikor, birincil antikora bağlanır. Bir substrat eklenir ve sinyal film üzerinde veya bir görüntüleme sistemi ile tespit edilir.

Western blot yöntemi, bir proteinin varlığını doğrulamak, örnekler arasındaki ekspresyon seviyelerini karşılaştırmak ve translasyon sonrası modifikasyonları tespit etmek için kullanılır. HIV için doğrulama testi ve Lyme hastalığı testi de dahil olmak üzere araştırmalarda ve klinik teşhislerde kullanılır. Ayrıca antikorları doğrulamak ve hedef dışı etkileri kontrol etmek için de kullanılır.

Bu teknik en iyi ihtimalle yarı niceldir. Dikkatli kontroller ve normalizasyon gerektirir. Zaman alıcıdır ve hassas olabilir. Ancak moleküler biyolojide standart bir araç olmaya devam etmektedir.