Вестерн-блоттинг позволяет обнаружить специфический белок в образце. Белки разделяются по размеру, переносятся на мембрану и обрабатываются антителом. В результате образуется полоса в положении, соответствующем молекулярной массе белка. Если полоса присутствует, значит, белок присутствует. Если она отсутствует, значит, белка нет. Это простая концепция, но метод включает множество этапов и множество возможностей для ошибок.

Процедура состоит из нескольких этапов. Белки извлекаются из клеток или тканей и денатурируются. Их наносят на полиакриламидный гель и разделяют методом электрофореза. Затем белки переносят на нитроцеллюлозную или ПВДФ-мембрану. Мембрану блокируют для предотвращения неспецифического связывания. Первичное антитело связывается с целевым белком. Вторичное антитело, связанное с ферментом или флуорофором, связывается с первичным антителом. Добавляют субстрат, и сигнал регистрируют на пленке или с помощью системы визуализации.

Вестерн-блоттинг используется для подтверждения наличия белка, сравнения уровней экспрессии между образцами и выявления посттрансляционных модификаций. Он применяется в научных исследованиях и клинической диагностике, включая подтверждающий тест на ВИЧ и тест на болезнь Лайма. Также он используется для валидации антител и проверки на наличие нежелательных побочных эффектов.

Этот метод в лучшем случае является полуколичественным. Он требует тщательного контроля и нормализации. Он трудоемкий и может быть капризным. Но он остается стандартным инструментом в молекулярной биологии.