ウェスタンブロット法は、サンプル中の特定のタンパク質を検出する手法です。タンパク質をサイズ別に分離し、メンブレンに転写した後、抗体を用いてプローブします。その結果、タンパク質の分子量に対応する位置にバンドが現れます。バンドが存在すれば、そのタンパク質は存在し、存在しなければ存在しないことになります。原理は単純ですが、この手法には多くの工程があり、エラーが発生する可能性も高くなります。

この手順はいくつかの段階からなります。まず、細胞または組織からタンパク質を抽出し、変性させます。次に、ポリアクリルアミドゲルにタンパク質をロードし、電気泳動によって分離します。分離したタンパク質はニトロセルロース膜またはPVDF膜に転写されます。膜は非特異的結合を防ぐためにブロッキング処理されます。一次抗体が標的タンパク質に結合します。酵素または蛍光色素に結合した二次抗体が一次抗体に結合します。基質を添加し、フィルムまたはイメージングシステムでシグナルを検出します。

ウェスタンブロット法は、タンパク質の存在を確認したり、サンプル間の発現レベルを比較したり、翻訳後修飾を検出したりするために用いられます。研究分野や臨床診断において、HIVの確定診断検査やライム病の検査などにも利用されています。また、抗体の妥当性を検証したり、オフターゲット効果の有無を確認したりするためにも用いられます。

この手法はせいぜい半定量的である。慎重な制御と正規化が必要であり、時間もかかり、扱いが難しい場合もある。しかし、分子生物学における標準的な手法であることに変わりはない。