웨스턴 블롯은 시료에서 특정 단백질을 검출하는 방법입니다. 단백질을 크기별로 분리한 후 막으로 옮기고 항체로 검출합니다. 그러면 해당 단백질의 분자량에 해당하는 위치에 밴드가 나타납니다. 밴드가 나타나면 단백질이 존재하는 것이고, 나타나지 않으면 단백질이 없는 것입니다. 원리는 간단하지만, 웨스턴 블롯 기법은 여러 단계를 거치고 오류 발생 가능성이 높습니다.

이 과정은 여러 단계로 이루어집니다. 먼저 세포 또는 조직에서 단백질을 추출하여 변성시킵니다. 그런 다음 폴리아크릴아미드 겔에 로딩하여 전기영동으로 분리합니다. 분리된 단백질은 니트로셀룰로스 또는 PVDF 멤브레인으로 전사됩니다. 비특이적 결합을 방지하기 위해 멤브레인을 차단 처리합니다. 1차 항체가 표적 단백질에 결합합니다. 효소 또는 형광 표지자가 결합된 2차 항체가 1차 항체에 결합합니다. 마지막으로 기질을 첨가하고 필름이나 이미징 시스템을 이용하여 신호를 검출합니다.

웨스턴 블롯은 단백질의 존재를 확인하고, 샘플 간의 발현 수준을 비교하며, 번역 후 변형을 검출하는 데 사용됩니다. 연구 및 임상 진단에 활용되며, HIV 확진 검사 및 라임병 검사에도 사용됩니다. 또한 항체의 유효성을 검증하고 비표적 효과를 확인하는 데에도 사용됩니다.

이 기법은 기껏해야 반정량적 방법이며, 신중한 대조군 설정과 정규화가 필요합니다. 또한 시간이 많이 소요되고 까다로울 수 있지만, 분자생물학에서 여전히 표준적인 도구로 사용되고 있습니다.