До появления высокопроизводительных параллельных машин последовательность ДНК считывалась по одному фрагменту за раз. Секвенирование по Сэнгеру использует обрывающие цепь дидезоксинуклеотиды для создания вложенных наборов нитей ДНК, которые заканчиваются в каждой возможной позиции. Когда фрагменты разделены по размеру, можно определить порядок оснований.

Каждый из четырех терминаторов содержит разный флуоресцентный краситель. Прибор для капиллярного электрофореза определяет цвет конечного основания по мере прохождения фрагментов через лазер, создавая хроматограмму цветных пиков. Метод отличается высокой точностью для прочтений длиной примерно до тысячи оснований.

Хотя в крупных проектах сейчас доминируют платформы нового поколения, секвенирование по Сэнгеру остается золотым стандартом для подтверждения отдельных вариантов и секвенирования коротких целевых участков. Многие клинические лаборатории по-прежнему полагаются на него из-за его надежности и простоты интерпретации результатов.

• Классический метод секвенирования с обрывом цепи
• Использует флуоресцентные дидезоксинуклеотиды.
• Обеспечивает точное считывание данных средней длины.
• По-прежнему используется для проверки и целевого анализа.