大規模並列マシンが登場する以前は、DNA配列は断片ごとに読み取られていました。サンガーシーケンス法では、鎖終結型ジデオキシヌクレオチドを用いて、あらゆる位置で末端が終わるDNA鎖の入れ子構造を生成します。断片をサイズ別に分離することで、塩基の順序を推測することができます。

4つの末端標識はそれぞれ異なる蛍光色素で標識されている。キャピラリー電気泳動装置は、断片がレーザー光を通過する際に末端塩基の色を検出し、色のついたピークのクロマトグラムを生成する。この方法は、約1000塩基までの読み取りにおいて非常に高い精度を発揮する。

次世代シーケンシングプラットフォームが大規模プロジェクトを席巻するようになったとはいえ、サンガーシーケンシングは個々の変異の検証や短い標的領域のシーケンシングにおいて依然として標準的な手法である。多くの臨床検査室は、その信頼性と解釈の容易さから、今もなおサンガーシーケンシングに頼っている。

• 古典的な鎖終結シーケンス法
• 蛍光性ジデオキシヌクレオチドを使用する
• 中程度の長さの正確な読み取り値を生成する
• 検証および対象分析に依然として使用されています