Antes de la llegada de las máquinas de secuenciación masiva en paralelo, la secuencia de ADN se leía fragmento a fragmento. La secuenciación de Sanger utiliza dideoxinucleótidos terminadores de cadena para generar conjuntos anidados de hebras de ADN que terminan en todas las posiciones posibles. Al separar los fragmentos por tamaño, se puede deducir el orden de las bases.

Cada uno de los cuatro terminadores lleva un colorante fluorescente diferente. Un instrumento de electroforesis capilar detecta el color de la base final a medida que los fragmentos pasan por un láser, generando un cromatograma de picos coloreados. El método es muy preciso para lecturas de hasta aproximadamente mil bases.

Aunque las plataformas de última generación dominan actualmente los grandes proyectos, la secuenciación de Sanger sigue siendo el método de referencia para validar variantes individuales y secuenciar regiones cortas específicas. Muchos laboratorios clínicos aún confían en ella por su fiabilidad y su interpretación sencilla.

• Método clásico de secuenciación por terminación de cadena
• Utiliza dideoxinucleótidos fluorescentes.
• Produce lecturas precisas de longitud moderada.
• Todavía se utiliza para validación y análisis dirigido.