Avant l'avènement des machines à haut débit, la séquence d'ADN était lue fragment par fragment. Le séquençage Sanger utilise des didésoxynucléotides, des marqueurs de terminaison de chaîne, pour générer des ensembles imbriqués de brins d'ADN se terminant à chaque position possible. La séparation des fragments selon leur taille permet de déduire l'ordre des bases.

Chacun des quatre terminateurs porte un colorant fluorescent différent. Un appareil d'électrophorèse capillaire détecte la couleur de la base finale lorsque les fragments traversent un laser, produisant un chromatogramme de pics colorés. La méthode est très précise pour des lectures allant jusqu'à environ un millier de bases.

Bien que les plateformes de nouvelle génération dominent désormais les grands projets, le séquençage Sanger demeure la méthode de référence pour la validation des variants individuels et le séquençage de courtes régions cibles. De nombreux laboratoires cliniques continuent de s'y fier pour sa fiabilité et sa simplicité d'interprétation.

• Méthode classique de séquençage par terminaison de chaîne
• Utilise des didésoxynucléotides fluorescents
• Produit des lectures précises de longueur modérée
• Toujours utilisé pour la validation et l'analyse ciblée