Antes das máquinas de sequenciação massiva paralela, a sequência de ADN era lida um fragmento de cada vez. A sequenciação de Sanger utiliza dideoxinucleótidos terminadores de cadeia para gerar conjuntos aninhados de cadeias de ADN que terminam em todas as posições possíveis. Quando os fragmentos são separados por tamanho, a ordem das bases pode ser deduzida.

Cada um dos quatro terminadores transporta um corante fluorescente diferente. Um instrumento de eletroforese capilar deteta a cor da base final à medida que os fragmentos passam por um laser, produzindo um cromatograma de picos coloridos. O método é altamente preciso para leituras até aproximadamente mil bases.

Embora as plataformas de nova geração dominem atualmente os grandes projetos, a sequenciação Sanger continua a ser o padrão de ouro para validar variantes individuais e sequenciar regiões-alvo curtas. Muitos laboratórios clínicos ainda o utilizam devido à sua fiabilidade e interpretação direta.

• Método clássico de sequenciação por terminação de cadeia
• Utiliza dideoxinucleótidos fluorescentes
• Produz leituras precisas de comprimento moderado.
• Ainda utilizado para validação e análise dirigida.