La pupille est l'ouverture ajustable au centre de l'iris qui régule la quantité de lumière entrant dans l'œil. Elle apparaît noire car la majeure partie de la lumière qui la traverse est absorbée à l'intérieur de l'œil.

En pleine lumière, l'iris contracte la pupille, réduisant ainsi l'intensité lumineuse sur la rétine et augmentant la profondeur de champ. En faible luminosité, la pupille se dilate pour laisser passer davantage de lumière. Cette réponse est automatique et consensuelle : la lumière dans un œil provoque la constriction des deux pupilles. La taille de la pupille est également influencée par la charge cognitive, l'excitation émotionnelle et certains médicaments. Les cliniciens examinent la réactivité pupillaire comme un moyen rapide d'évaluer le fonctionnement du tronc cérébral.

Le diamètre de la pupille varie généralement de deux à huit millimètres. Une dilatation ou une constriction extrême peut être provoquée par des médicaments ou des affections neurologiques. La pupille étant l'ouverture du système optique, sa taille influe sur la luminosité et la netteté de l'image rétinienne.

Chaque photon qui contribue à la vision traverse d'abord la pupille.