DNA klipps och klistras i molekylärbiologilaboratorier. Klippningen görs med restriktionsenzymer. Klistringen görs med ligas. En ligas är ett enzym som sammanfogar DNA-fragment genom att bilda en fosfodiesterbindning mellan 3'-hydroxyländen på ett fragment och 5'-fosfatänden på ett annat. Utan ligas skulle genkloning vara omöjlig.
Ligaser är också viktiga i cellen. DNA-ligas tätar hack i DNA-ryggraden under replikering och reparation. När replikationsmaskineriet kopierar DNA producerar det korta fragment som måste sammanfogas. Ligas gör sammanfogningen. När DNA skadas använder reparationsvägarna ligas för att återställa strängens integritet. Utan det skulle genomet falla isär.
I laboratoriet är T4 DNA-ligas det vanligaste. Det kommer från bakteriofag T4 och fungerar effektivt vid rumstemperatur. Det sammanfogar både klibbiga ändar, som är komplementära enkelsträngade överhäng, och trubbiga ändar, som inte har något överhäng. Klibbiga ändar är mer effektiva eftersom de komplementära överhängen glödgar innan ligasen förseglar bindningen.
Ligas är en arbetshäst inom genteknik. Det används vid kloning, bibliotekskonstruktion och förberedelse av nästa generations sekvenseringsbibliotek. Det är ett litet enzym med en stor uppgift: att hålla ihop genomet och låta forskare bygga nya.
Comments
No comments yet. Be the first to share a thought.
Leave a comment