DNA se v molekulárně biologických laboratořích stříhá a lepí. Řezání se provádí restrikčními enzymy. Lepení se provádí ligázou. Ligáza je enzym, který spojuje fragmenty DNA dohromady vytvořením fosfodiesterové vazby mezi 3' hydroxylovým koncem jednoho fragmentu a 5' fosfátovým koncem druhého. Bez ligázy by klonování genů bylo nemožné.
Ligázy jsou v buňce také nezbytné. DNA ligáza utěsňuje rýhy v páteři DNA během replikace a opravy. Když replikační aparát kopíruje DNA, produkuje krátké fragmenty, které je nutné spojit. Spojování provádí ligáza. Když je DNA poškozena, opravné dráhy používají ligázu k obnovení integrity řetězce. Bez ní by se genom rozpadl.
V laboratoři se nejčastěji používá DNA ligáza T4. Pochází z bakteriofága T4 a funguje efektivně při pokojové teplotě. Spojuje jak lepkavé konce, které jsou komplementárními jednovláknovými přesahy, tak i tupé konce, které nemají přesah. Ligace lepkavých konců je účinnější, protože komplementární přesahy se spojí dříve, než ligáza utěsní vazbu.
Ligáza je pracant genetického inženýrství. Používá se při klonování, konstrukci knihoven a přípravě knihoven pro sekvenování nové generace. Je to malý enzym s velkým úkolem: držet genom pohromadě a umožnit vědcům vytvářet nové.
Comments
No comments yet. Be the first to share a thought.
Leave a comment