DNA klippes og indsættes i molekylærbiologiske laboratorier. Klipningen udføres af restriktionsenzymer. Indsætningen udføres af ligase. En ligase er et enzym, der forbinder DNA-fragmenter ved at danne en fosfodiesterbinding mellem 3'-hydroxylænden af et fragment og 5'-fosfatlænden af et andet. Uden ligase ville genkloning være umulig.
Ligaser er også essentielle i cellen. DNA-ligase forsegler rifter i DNA-rygraden under replikation og reparation. Når replikationsmaskineriet kopierer DNA, producerer det korte fragmenter, der skal forbindes. Ligase foretager sammenføjningen. Når DNA er beskadiget, bruger reparationsveje ligase til at genoprette strengens integritet. Uden den ville genomet falde fra hinanden.
I laboratoriet er T4 DNA-ligase den mest almindeligt anvendte. Den kommer fra bakteriofag T4 og virker effektivt ved stuetemperatur. Den forbinder både klæbrige ender, som er komplementære enkeltstrengede overhæng, og stumpe ender, som ikke har noget overhæng. Klæbrig-endeligering er mere effektiv, fordi de komplementære overhæng annealer, før ligasen forsegler bindingen.
Ligase er en arbejdshest inden for genteknologi. Det bruges til kloning, bibliotekskonstruktion og forberedelse af næstegenerations sekventeringsbiblioteker. Det er et lille enzym med en stor opgave: at holde genomet sammen og lade forskere bygge nye.
Comments
No comments yet. Be the first to share a thought.
Leave a comment