DNA klippes og limes i molekylærbiologilaboratorier. Klippingen gjøres av restriksjonsenzymer. Limingen gjøres av ligase. En ligase er et enzym som binder DNA-fragmenter sammen ved å danne en fosfodiesterbinding mellom 3'-hydroksylenden av ett fragment og 5'-fosfatenden av et annet. Uten ligase ville genkloning være umulig.
Ligaser er også essensielle i cellen. DNA-ligase tetter hakk i DNA-ryggraden under replikasjon og reparasjon. Når replikasjonsmaskineriet kopierer DNA, produserer det korte fragmenter som må sammenføyes. Ligase gjør sammenføyningen. Når DNA er skadet, bruker reparasjonsveier ligase for å gjenopprette integriteten til tråden. Uten den ville genomet falle fra hverandre.
I laboratoriet er T4 DNA-ligase den mest brukte. Den kommer fra bakteriofag T4 og fungerer effektivt ved romtemperatur. Den forbinder både klebrige ender, som er komplementære enkelttrådete overheng, og butte ender, som ikke har noe overheng. Klebrig-endeligering er mer effektiv fordi de komplementære overhengene glødes før ligasen forsegler bindingen.
Ligase er en arbeidshest innen genteknologi. Den brukes i kloning, bibliotekkonstruksjon og forberedelse av neste generasjons sekvenseringsbiblioteker. Det er et lite enzym med en stor jobb: å holde genomet sammen og la forskere bygge nye.
Comments
No comments yet. Be the first to share a thought.
Leave a comment