蛋白质混合物流经装满珠子的色谱柱。一些蛋白质会吸附在珠子上,而另一些则会流过。通过改变条件,吸附的蛋白质会被逐一释放出来。这就是色谱法,一种分离和纯化生物分子的技术,也是生物制造下游工艺的基础。
原理很简单。分子对固定相(珠子)和流动相(流过的液体)的亲和力不同。这些差异导致它们以不同的速度移动,从而实现分离。该技术有多种形式。离子交换色谱法根据电荷分离分子。尺寸排阻色谱法根据分子大小分离分子。亲和色谱法利用特异性结合相互作用,例如抗体与其靶标的结合。疏水相互作用色谱法根据疏水性分离分子。
色谱法在生物技术领域应用广泛。它用于纯化胰岛素、单克隆抗体和疫苗;分析血液样本中的药物及其代谢物;分离DNA片段进行测序。它是分析化学和工艺开发中的主力军。
挑战在于规模化。实验室适用的色谱柱可能不适用于工厂。填料、流速、压力和缓冲液都必须进行优化。单个纯化步骤可能耗时数小时,成本高达数千美元。但最终获得的纯度值得付出这些努力。
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